AVALIAÇÃO DOS INDICADORES DE METABOLISMO, METILAÇÃO DO DNA E POLIMORFISMOS FUNCIONAIS DE MTHFR (RS1801133, C677T; RS1801131, A1298C) EM GLIOMAS
DNA genômico
Polimorfismos
MTHFR
Homocisteína
Ácido úrico
Glioma
Neoplasia encefálica
Glioblastoma
DNA
Polimorfismo (Genética)
Genoma humano
Homocisteína
Glioma
Genomic DNA
MTHFR polymorphisms
Homocysteine
DNA hypomethylation
Folate
MTHFR
Uric acid
Faria, Giselle Marianne | Posted on:
2017
Abstract
Introdução: Gliomas constituem o tumor cerebral primário de origem neuroepitelial mais comum, agressivo e fatal em adultos, e caracterizado por padrão anabólico acelerado, altamente proliferativo e infiltrativo. O tratamento com quimioterapia citotóxica e altas doses de radiação ionizante induzem efeitos secundários de instabilidade genômica, mutações somáticas, e alterações epigenéticas relacionadas à metilação do DNA. Objetivo: Analisar a presença de marcadores moleculares relacionados ao metabolismo de ácidos nucleicos e polimorfismos funcionais em enzima da via metabólica do folato, considerados críticos nos processos de síntese e metilação do DNA. Material e Métodos: A coorte incluiu 154 pacientes com glioma maligno recidivo em estágio terminal. Os pacientes foram agrupados conforme a classificação histológica (GBM = 104; AA = 36) e localização da lesão tumoral (lobar: n=105; profunda: n=47). DNA genômico (gDNA) foi extraído de células sanguíneas periféricas e analisado quanto ao percentual de metilação global (n=118), presença de polimorfismos (snps, n = 96) no gene MTHFR (C677T, rs1801133 e A1298C, rs1801131), e genotipagem pareada (n=11) em amostras do gDNA e DNA tumoral. Amostras de soro foram utilizadas para dosagem de ácido úrico (n=82) e homocisteína (n=72). Análise estatística incluiu testes não paramétricos, análises de correlação de Spearman (bivariável e ponto bisserial), teste do Chi-quadrado e análise de loglinear utilizando programa SPSS 20.0, com um intervalo de confiança de 95% (p<0,05).
Resultados e Discussão: 48,8% dos pacientes apresentaram aumento (p<0,001) nos níveis de ácido úrico. Todos os pacientes apresentaram homocisteína elevada (8 vezes; > 100μM) e 75% (p<0,001) apresentaram hipometilação global do gDNA. Foi encontrada uma correlação significativa, negativa e moderada entre os níveis de homocisteína e hipometilação global (p=0,041; rho= - 0,369; n=31). 59,4% dos pacientes apresentaram pelo menos um alelo mutado para rs1801133 (C677T; 45,83% = CT e 13,54% = TT) e 47% apresentaram pelo menos um alelo mutado para rs1801131 (A1298C; AC = 40,62% e CC = 6,26%). Pacientes com genótipo TT para rs1801133 (C677T) apresentaram redução significativa (p=0,043) na hipometilação de gDNA, e correlação significativa, negativa e moderada (p=0,005; rho= - 0,517; n=28) entre essas duas variáveis. A combinação de genótipos CT_AA indicou uma contribuição individual forte e significativa (p=0,045, escore Z=2,004) para a metilação do gDNA.
Pacientes com percentual de metilação até 50% apresentaram diferença entre os diplotipos CC_AC e CT_AA (p<0,1) e tendência a menor hipometilação também para o diplotipo TT_AA. Foi observada diferença significativa entre localização profunda e lobar (p=0,044) e correlação significativa, negativa e fraca (p=0,043; rho= - 0,271; n=56) entre a localização profunda e hipometilação global do gDNA com decréscimo 1,6 vezes no percentual de hipometilação. Estudos de associação genética evidenciaram contribuições individuais fortes e significativas para modelo de hereditariedade aditivo (rs1801133, C677T: p<0,001; escore Z = 4,306 / rs1801131, A1298C: p= 0,005; escore Z= 2,799) e dominante (rs1801133, C677T: p=0,011; escore Z = 2,557 / rs1801131, A1298C: p=0,065; escore Z=1,848) para ambos os snps, para os homozigotos mutados (rs1801133, C677T: p<0,001; escore Z = - 4,207 / rs1801131, A1298C: p<0,001; escore Z= - 4,437) e para a histologia (rs1801133, C677T: p<0,001; escore Z = - 5,765 / rs1801131, A1298C: p<0,001; escore Z = 4,983). Também foi possível evidenciar
contribuições individuais fortes e significativas para modelo de hereditariedade aditivo (rs1801133, C677T: p<0,001; escore Z = 4,699 / rs1801131, A1298C: p= 0,005; escore Z= 2,806) e dominante (rs1801133, C677T: p=0,005; escore Z = 2,779), para homozigotos mutados (rs1801133, C677T: p<0,001; escore Z = - 4,019 / rs1801131, A1298C: p<0,001; escore Z= - 4,279) e para localização tumoral (rs1801133, C677T: p=0,001; escore Z = 3,315 / rs1801131, A1298C: p=0,010; escore Z= 2,593). Foram encontradas contribuições individuais fortes e significativas para as combinações de
genótipo homozigoto duplo mutado para ambos snps (p<0,001; escore Z = - 4,701), para os modelos aditivos combinados de ambos os snps (p=0,035, escore Z=2,100); para a combinação do genótipo duplo mutado do rs 1801131 (A1298C) tanto com o modelo aditivo (p=0,025, escore Z=-2,248) como com o modelo dominante do rs1801133 (C677T, p=0,006, escore Z=-2,760) e para a histologia (p<0,001, escore Z=9,019).Os estudos de associação genética identificaram contribuições individuais fortes e significativas para combinação de genótipo homozigoto duplo mutado para ambos snps
(p<0,001; escore Z = - 5,594), para os modelos aditivos combinados de ambos os snps (p<0,001, escore Z=5,425) e para a combinação do modelo dominante do rs1801133 (C677T) com o modelo aditivo do rs1801131 (A1298C, p<0,001, Z=3,925) e para a localização tumoral (p<0,001, escore Z=4,724). A análise pareada entre o gDNA dos pacientes e o DNA tumoral evidenciou alterações genéticas no gene MTHFR (63,3%) dos pacientes. Conclusão: Mesmo após a recidiva tumoral, foi possível identificar diferenças significativas no percentual de hipometilação do gDNA de pacientes com glioma recidivo, sendo o genótipo TT do rs 1801133 (C677T) e a localização profunda variáveis contribuindo significativamente para redução proeminente no padrão de hipometilação. Considerando-se a correlação negativa entre metilação global do DNA e os níveis de homocisteína, o acompanhamento periódico e análise em conjunto dos snps da via do folato devem ser considerados parâmetros indicadores sugestivos de progressão / recorrência. A bagagem genética individual em modelos de contraste específicos, isolados ou combinados pode fornecer ferramentas para acompanhamento dos pacientes com glioma maligno minimizando influências epigenéticas
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DissertaçãoSource
FARIA, Giselle Marianne. Avaliação dos indicadores de metabolismo, metilação do DNA e polimorfismos funcionais de MTHFR (rs1801133, C677T; rs1801131, A1298C) em gliomas. 2017. 135 f. Dissertação (Mestrado em Neurologia/Neurociências) - Universidade Federal Fluminense, Niterói, 2017.Subject(s)
GliomaDNA genômico
Polimorfismos
MTHFR
Homocisteína
Ácido úrico
Glioma
Neoplasia encefálica
Glioblastoma
DNA
Polimorfismo (Genética)
Genoma humano
Homocisteína
Glioma
Genomic DNA
MTHFR polymorphisms
Homocysteine
DNA hypomethylation
Folate
MTHFR
Uric acid
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