Investigação do potencial adipogênico dos agrotóxicos ametrina e óxido de fembutatina

Abstract

O Brasil é um dos maiores consumidores de agrotóxicos do mundo. Trabalhos recentes mostram que essas substâncias podem atuar como desreguladores endócrinos, alterando a função endócrina e causando efeitos adversos no organismo. Entre as alterações promovidas pelos desreguladores endócrinos está a adipogênese, que pode contribuir para o desenvolvimento da obesidade. Um dos mecanismos da adipogênese é a ativação do receptor ativado por proliferadores peroxissomais gama (PPAR), um dos reguladores chave deste mecanismo. Quando ativado por um ligante, ele forma um heterodímero com outro receptor nuclear, o receptor retinóide X alfa (RXR) e se liga a sequências específicas do DNA presentes na região promotora dos seus genes alvo, regulando a expressão dos mesmos. Considerando o uso intensivo dos agrotóxicos e os poucos conhecimentos sobre seu efeito desregulador endócrino, o presente estudo teve como objetivo investigar o potencial adipogênico dos agrotóxicos ametrina e óxido de fembutatina. Para definir as concentrações não tóxicas dos agrotóxicos a serem utilizadas nos experimentos, foi realizado o ensaio de citotoxicidade com o reagente MTT, o potencial adipogênico foi investigado através do ensaio de diferenciação de adipócitos e o efeito sobre o PPAR e RXR foi avaliado através do ensaio de transfecção e gene repórter da luciferase. No ensaio de citotoxicidade, células 3T3-L1 e HeLa foram tratadas com DMSO ou concentrações crescentes dos agrotóxicos por 24 horas e a seguir, foi adicionado o MTT. Nesse experimento, a ametrina não se mostrou tóxica para as células 3T3-L1, porém começou a induzir morte das células HeLa nas concentrações 10µM e 100µM. O óxido de fembutatina por sua vez, apresentou toxicidade em suas maiores concentrações para ambos os tipos celulares, nas células 3T3-L1 induziu morte de 43% e 96% nas concentrações de 1µM e 10µM e nas células HeLa de 33% e 83% nas concentrações de 1 e 10µM, respectivamente. No ensaio de diferenciação, células 3T3- L1 foram tratadas com DMSO, rosiglitazona 0,1µM ou concentrações crescentes dos agrotóxicos por 14 dias. Como resultado, a ametrina induziu acúmulo lipídico intenso na concentração 10µM, enquanto o óxido de fembutatina induziu acúmulo leve na concentração 0,1µM. No ensaio de transfecção e gene repórter, células HeLa foram cotransfectadas com os plasmídeos GAL4-PPAR ou GAL4-RXRα e seu elemento responsivo fusionado ao gene repórter da luciferase e tratadas com DMSO, rosiglitazona 10µM, agonista de PPAR, ácido 9-cis retinóico 10µM, agonista de RXRα ou concentrações crescentes dos agrotóxicos por 24 horas. Nesse experimento, a ametrina não modificou a atividade transcricional do PPAR, enquanto o óxido de fembutatina ativou esse receptor 3,8 vezes na concentração 0,5µM, representando 11% da ativação promovida pela rosiglitazona, que foi de 33 vezes. Nenhum dos agrotóxicos modificou a atividade do RXRα. Como conclusão, no presente estudo, observou-se que ametrina e o óxido de fembutatina apresentaram efeito adipogênico em células 3T3-L1 e o óxido de fembutatina ativou o PPAR, podendo ser considerado agonista parcial desse receptor. Estes resultados permitem maior conhecimento sobre alguns dos agrotóxicos amplamente utilizados no Brasil, porém mais estudos são necessários para compreensão dos seus efeitos em organismos complexos, incluindo o ser humano.