Caracterização de peptidases em extratos proteicos de isolados de Trichomonas vaginalis

Abstract

Tricomoníase é a doença sexualmente transmissível não viral mais comum no mundo é causada por Trichomonas vaginalis, um protozoário flagelado que coloniza o trato urogenital humano. Os tratamentos disponíveis para essa parasitose são da classe dos nitroimidazóis, e esses medicamentos apresentam eficácia variável com relatos na literatura sobre cepas resistentes. As peptidases têm sido alvo para a produção de novos fármacos, visto que desempenham uma série de funções vitais para os parasitos. Os inibidores de peptidases se destacaram a partir do descobrimento das peptidases do vírus da imunodeficiência adquirida (HIV), sendo atualmente utilizados em indivíduos HIV-positivos. Todavia, os estudos acerca de aspártico peptidases em T. vaginalis ainda são pouco conhecidos. No presente trabalho utilizamos técnicas de microscopia óptica, bioquímica e de biologia molecular para estudar dois isolados de T. vaginalis. As curvas de crescimento dos dois isolados mostraram perfis diferentes, onde o isolado G apresentou um crescimento mais rápido e mais expressivo do que o isolado T. A análise morfológica revelou que as duas amostras coradas com Giemsa não apresentam diferenças entre si, e o sequenciamento utilizando os iniciadores para o alvo ITS (espaçador transcrito interno) revelou que ambos os isolados apresentam 100% de homologia com as sequencias de T. vaginalis depositadas no banco de dados GenBank, e são idênticos. Os ensaios bioquímicos mostraram que os lisados celulares dos isolados apresentam atividade proteolítica em uma ampla faixa de pH, e ainda que o isolado T exibe uma atividade proteolítica maior do que a observado no isolado G. Em pH ácido, as atividades proteolíticas de ambos os isolados foram inibidas na presença de pepstatina, lopinavir, ritonavir e E-64, indicando a presença de aspártico e cisteíno peptidases, respectivamente. Conjuntamente, nossos resultados indicam que os isolados estudados de T. vaginalis apresentaram perfis de crescimento e características bioquímicas diferentes, o que sugere que se trata de duas cepas distintas. Entretanto, os iniciadores que amplificam regiões do gene ITS1 e ITS2 mostraram que os isolados apresentam 100% de similaridade entre si. Os dados gerados neste estudo fornecerão subsídios que irão contribuir para melhor compreensão dos mecanismos de patogenicidade deste parasito e avaliar os efeitos dos possíveis alvos dos IPs/HIV para a busca de alvos terapêuticos.