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Title: Efeito da lactoferrina no crescimento, adesão, biofilme e sinergismo com antimicrobianos em cepas de bacteroides fragilis e bacteroides thetaiotaomicron
Authors: Almeida, Juliana Soares de Sá
metadata.dc.contributor.advisor: Paula, Geraldo Renato de
metadata.dc.contributor.advisorco: Lobo, Leandro Araújo
metadata.dc.contributor.members: Silva, Deyse Christina Vallim da
Gonzalez, Alice Gonçalves Martins
Issue Date: 2019
Citation: ALMEIDA, Juliana Soares de Sá. Efeito da lactoferrina no crescimento, adesão, biofilme e sinergismo com antimicrobianos em cepas de bacteroides fragilis e bacteroides thetaiotaomicron. 86f. Dissertação (Mestrado em Programa de Pós-Graduação em Ciências Aplicadas a Produtos para Saúde) - Universidade Federal Fluminense, Niterói, 2019.
Abstract: As espécies Bacteroides fragilis e B. thetaiotaomicron compõem a microbiota humana, a qual é regulada por diversos fatores do hospedeiro, incluindo proteínas com atividades antimicrobianas como a lactoferrina (Lf). Essa glicoproteína está presente em diversas secreções e sua principal atividade é quelar íons de ferro. Quando atinge o trato digestivo a Lf é digerida por pepsinas gástricas gerando um peptídeo bactericida denominado lactoferricina. Este estudo teve como objetivo avaliar alterações no crescimento das espécies B. fragilis e B. thetaiotaomicron, na presença de apo e holo-lactoferrina e lactoferricina em meio semi-definido para Bacteroides spp. suplementado com diferentes fontes de ferro; a influência da Lf na adesão bacteriana à laminina-1; o efeito da Lf sobre a formação do biofilme e o efeito sinérgico ou antagônico da associação de Lf com os antimicrobianos cefoxitina e cloranfenicol. As cepas foram cultivadas anaerobicamente em caldo Brucella ou Brain Heart Infusion e incubadas por 24 horas a 37 ºC. Todos os experimentos foram realizados em câmara de anaerobiose (80% N2, 10% CO2 e 10% H2). O crescimento das espécies B. fragilis e B. thetaiotaomicron foi avaliado em ensaios de microdiluição em caldo, na presença de apo e holo-lactoferrina e lactoferricina. Os ensaios de adesão à laminina-1 foram realizados em lamínulas depositadas em placas de polietileno, visualizadas através de microscopia de fluorescência e quantificadas pelo software Image J. A formação do biofilme foi avaliada em ensaios de microdiluição em placas. A avaliação do sinergismo entre apo e holo-lactoferrina e os antimicrobianos foi realizada através de microdiluição em caldo. O crescimento bacteriano não foi inibido pela presença da apo, holo-lactoferrina e lactoferricina. A Lf inibiu a adesão de B. fragilis à laminina-1. A capacidade de formação de biofilme foi fortemente inibida na presença de Lf e não houve sinergismo ou antagonismo entre a associação da Lf com os antimicrobianos. A atividade biológica da Lf sobre as espécies analisadas parece estar restrita aos mecanismos de adesão bacteriana
metadata.dc.description.abstractother: The species Bacteroides fragilis and Bacteroides thetaiotaomicron make up the human microbiota, which is regulated by several host factors, including proteins with antimicrobial activities such as lactoferrin (Lf). This glycoprotein is present on several secretions, and its main activity is chelating iron ions. When it reaches the digestive tract, Lf is digested by gastric pepsins generating a bactericidal peptide called lactoferricin (Lfcin). This study aimed to evaluate growth alterations of B. thetaiotaomicron and B. fragilis in the presence of apo and holo-lactoferrin and Lfcin in semi-defined medium for Bacteroides spp. supplemented with different iron sources; the influence of Lf on bacterial adhesion to laminin-1; the effect of Lf on biofilm formation and the synergistic or antagonistic effect of Lf in association with antimicrobials cefoxitin and chloramphenicol. The strains were cultivated anaerobically in Brucella or Brain Heart Infusion broth and incubated for 24 hours at 37 ºC. All experiments were performed in an anaerobic chamber (80% N2, 10% CO2 and 10% H2). Growth of B. fragilis and B. thetaiotaomicron was evaluated in broth microdilution assays in the presence of apo and holo-lactoferrin and lactoferricin. Laminin-1 adhesion assays were performed on coverslips deposited on polyethylene plates, visualized by fluorescence microscopy and quantified by Image J software. Biofilm formation was investigated using a microtiter plate assay. The synergism between apo and holo-lactoferrin and antimicrobials was evaluated by broth microdilution. The presence of apo, holo-lactoferrin and Lfcin did not inhibit bacterial growth. Lf inhibited adhesion of B. fragilis to laminin-1. The Lf strongly inhibited biofilm formation capacity and there was no synergism or antagonism between the associations of Lf with antimicrobials. The biological activity of Lf on the analyzed species seems to be restricted to bacterial adhesion mechanisms
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/12703
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