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Title: Peptideogalactomananas da parede celular de isolados animal e humano de Histoplasma capsulatum: aspectos imunológicos e filogenéticos
Authors: Freitas, Giulia Maria Pires dos Santos
metadata.dc.contributor.advisor: Silva, Marcia Ribeiro Pinto da
metadata.dc.contributor.members: Silva, Elisabeth Martins da Rocha da
Machado, Ricardo Luiz Dantas
Xisto, Mariana Ingrid Dutra da Silva
Pinheiro, Rodrigo Rollin
Issue Date: 2019
Abstract: A histoplasmose é uma micose sistêmica causada pelo fungo termodimórfico Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Este micro-organismo é prevalente nas Américas, sendo encontrado no solo contaminado com fezes de morcegos e aves. Essa doença é umas das mais reportadas como causa de morbidade e mortalidade entre indivíduos imunossuprimidos, pois os medicamentos ministrados para conter a infecção geralmente tem pouca eficácia nessa população. A parede celular é uma estrutura essencial para os fungos, uma vez que mantém a viabilidade e morfologia celular, além de proteger a célula fúngica contra danos mecânicos. Na sua porção mais externa, apresenta moléculas glicosiladas que estão envolvidas em importantes funções biológicas relacionadas com a virulência e a patogenicidade, além de ser uma fonte significante de antígenos. Visto a importância destas moléculas, este trabalho teve o objetivo de caracterizar quimicamente peptideopolissacarídeos extraídos da parede de células leveduriformes de dois isolados de H. capsulatum, avaliando o possível envolvimento desses antígenos na modulação da resposta imune do hospedeiro. Nossos resultados demonstraram que os peptideopolissacarídeos extraídos e purificados da parede celular de ambos os isolados de H. capsulatum são compostos, majoritariamente, por galactose e manose, sugerindo uma galactomanana. No presente trabalho, analisamos também a reatividade destas moléculas frente à soros de pacientes com histoplasmose, onde observamos que há reatividade destes soros com ambas as moléculas estudadas, entretanto as peptideogalactomananas proveniente do isolado animal é significativamente mais reativo em comparação ao isolado clínico. Como as moléculas estudadas são compostas por partes proteicas e de carboidratos, foi realizado um ELISA utilizando as moléculas tratadas com m-periodato de sódio e proteinase K. Foi observado a importância de ambos os epítopos para a reatividade da molécula, porém com uma predominância da parte composta por açúcares. Em experimento “in vitro”, foi demonstrado que ambas as moléculas são capazes de inibir a endocitose e fagocitose de H. capsulatum pela linhagem celular A549 e macrófagos peritoneais de camundongos C57BL/6. Já “in vivo”, os camundongos C57BL/6 foram estimulados com as peptideogalactomanas de H. capsulatum, para a realização da quantificação de citocinas, onde observou-se um predomínio da secreção de citocinas pró-inflamatórias. Os estudos sobre as peptideogalactomananas são importantes, pois podem contribuir para o conhecimento dos possíveis mecanismos envolvidos na interação do fungo patogênico com o hospedeiro.
metadata.dc.description.abstractother: Histoplasmosis is a systemic mycosis caused by the thermodimorphic fungus Histoplasma capsulatum var. capsulatum. This microorganism is prevalent in the Americas and is found in soil contaminated with bat and bird droppings. This disease is one of the most reported as a cause of morbidity and mortality among immunosuppressed individuals, since the drugs used to contain the infection usually have little efficacy in this population. The cell wall is an essential structure for fungi as it maintains cell viability and morphology, and protects the fungal cell against mechanical damage. In its outermost portion, it has glycosylated molecules that are involved in important biological functions related to virulence and pathogenicity, in addition to being a significant source of antigens. Given the importance of these molecules, this work aimed to chemically characterize peptideopolysaccharides extracted from the yeast cell wall of two H. capsulatum isolates, evaluating the possible involvement of these antigens in the modulation of host immune response. Our results demonstrated that the peptideopolysaccharides extracted and purified from the cell wall of both H. capsulatum isolates are mainly composed of galactose and mannose, suggesting a galactomannan. In the present work, we also analyzed the reactivity of these molecules against sera from patients with histoplasmosis, where we observed that there is reactivity of these sera with both molecules studied, however the peptideogalactomannans from the animal isolate is significantly more reactive compared to the clinical isolate. As the molecules studied are composed of protein and carbohydrate parts, an ELISA was performed using the molecules treated with sodium m-periodate and proteinase K. It was observed the importance of both epitopes for the reactivity of the molecule, but with a predominance of the protein. part composed of sugars. In an in vitro experiment, it was shown that both molecules are capable of inhibiting H. capsulatum endocytosis and phagocytosis by the A549 cell line and peritoneal macrophages of C57BL / 6 mice. Already “in vivo”, C57BL / 6 mice were stimulated with H. capsulatum peptide-galactomannans for cytokine quantification, where there was a predominance of proinflammatory cytokine secretion. Studies on peptideogalactomannans are important because they may contribute to the knowledge of the possible mechanisms involved in the interaction of the pathogenic fungus with the host.
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/13000
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