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dc.contributor.advisorSá, Mariana Emerenciano Cavalcanti de-
dc.contributor.authorPoubel, Caroline de Aguiar Pires-
dc.date.accessioned2020-06-26T17:24:53Z-
dc.date.available2020-06-26T17:24:53Z-
dc.date.issued2015-
dc.identifier.urihttps://app.uff.br/riuff/handle/1/14135-
dc.description.abstractA leucemia linfoblástica aguda de células precursoras B (LLA-cpB) é caracterizada por alterações cromossômicas e moleculares que auxiliam no diagnóstico e na estratificação de risco dos pacientes. As análises genômicas possibilitam a identificação de alterações moleculares adicionais que contribuem para a patogênese da LLA-cpB, como as deleções (Δ) em fatores de transcrição responsáveis pela regulação do desenvolvimento linfóide de células B. O gene IKZF1 codifica o fator de transcrição IKAROS, um dos reguladores principais da linfopoiese. Visto que as deleções em IKZF1 têm um papel de predição de recaídas, a análise das mesmas pode contribuir para uma melhor estratificação de risco terapêutico. Desta forma, foi realizado em nosso grupo um estudo anterior que rastreou alterações adicionais em LLA-cpB, incluindo as deleções em IKZF1, através da técnica de multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA). Embora a técnica de MLPA seja eficaz na identificação das deleções, o custo é alto e seus resultados precisam ser validados. Os objetivos deste estudo foram caracterizar as deleções encontradas no gene IKZF1 a nível genômico em crianças com LLA-cpB, além de implementar a técnica de PCR Multiplex (MP-PCR) para a identificação das mesmas. Para isso, foram incluídas no estudo 284 amostras de pacientes com LLA-cpB (idade entre 1-16 anos) diagnosticados no período de 2004-2015. A técnica de MP-PCR foi implementada através de duas reações (A e B) utilizando iniciadores que permitiram a identificação das deleções mais frequentes em IKZF1 (Δ2-3, Δ2-7, Δ2-8, Δ4-7 e Δ4-8). Em seguida, as amostras foram sequenciadas utilizando o ensaio comercial BigDye Terminator v3.1 Cycle sequencing e o sequenciador automático 3500 (Applied Biosystems). A amplificação dos produtos foi realizada com sucesso através da MP-PCR e o sequenciamento confirmou a especificidade da reação na detecção das deleções que foram propostas (31/284). Foi observado que a técnica de MP-PCR apresenta sensibilidade de 92% e especificidade de 75% quando comparada a MLPA na detecção das deleções mais comuns. Pode-se concluir que a MP-PCR foi implementada com sucesso, mostrando-se eficaz na detecção das deleções Δ2-3, Δ2-7, Δ2-8, Δ4-7 e Δ4-8.pt_BR
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dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal Fluminensept_BR
dc.rightsopenAccess*
dc.rightsopenAccesspt_BR
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/*
dc.titleIdentificação de deleções em IKZF1 na leucemia linfoblástica aguda de células precursoras B por PCR multiplexpt_BR
dc.typeTrabalho de conclusão de cursopt_BR
dc.subject.keywordLeucemia Linfoblástica Agudapt_BR
dc.subject.keywordCélulas Bpt_BR
dc.subject.keywordIKZF1pt_BR
dc.subject.keywordDeleçõespt_BR
dc.subject.keywordPCR Multiplexpt_BR
dc.contributor.membersRibeiro, Georgina Severo-
dc.contributor.membersBlunck, Caroline Barbieri-
dc.degree.levelgraduaçãopt_BR
dc.subject.descriptorLeucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoraspt_BR
dc.subject.descriptorFator de Transcrição Ikarospt_BR
dc.subject.descriptorLinfócitos Bpt_BR
dc.subject.descriptorReação em Cadeia da Polimerase Multiplexpt_BR
dc.subject.keywordotherAcute Lymphoblastic Leukemiapt_BR
dc.subject.keywordotherB-cellpt_BR
dc.subject.keywordotherIKZF1pt_BR
dc.subject.keywordotherDeletionspt_BR
dc.subject.keywordotherMultiplex PCRpt_BR
dc.description.abstractotherB-cell precursor acute lymphoblastic leukemia (Bcp-ALL) is characterized by the occurrence of chromosome and molecular alterations that impact in the diagnosis and risk stratification of patients. Genomic analyses allow the identification of additional molecular alterations that contribute to the pathogenesis of Bcp-ALL, such as deletions (Δ) of transcription factors accounting for the regulation of B lymphoid development. The IKZF1 gene encodes IKAROS transcription factor, a major regulator of lymphopoiesis. Considering that IKZF1 deletions predict relapse, the analysis of those deletions can contribute for a better therapeutic risk stratification. Thus, a previous study, performed by our group, screened for additional alterations in Bcp-ALL, including IKZF1 deletions, using the multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) approach. Although MLPA is efficient in identifying deletions, the cost is high and the results still need validation. The aims of the present study were to characterize the IKZF1 deletions at genomic level in children with Bcp-ALL, and to establish the Multiplex PCR (MP-PCR) in order to identify these deletions. Therefore, were included in this study 284 Bcp-ALL patients samples (age range 1-16 years) diagnosed between 2004 and 2015. MP-PCR was performed with two reactions (A and B) using primers that identified the most frequent IKZF1 deletions (Δ2-3, Δ2-7, Δ2-8, Δ4 -7 and Δ4-8). Then, the samples were sequenced using BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing kit and automated sequencer ABI 3500 (Applied Biosystems). Products amplification was successfully performed by the MP-PCR and further sequencing confirmed the specificity of the reaction in detecting those commons deletions (31/284). It was observed that the MP-PCR has a sensitivity of 92% and specificity of 75% when compared to the MLPA approach in detection the most common deletions. In conclusion, MP-PCR has been successfully established and proved to be efficient in detecting Δ2-3, Δ2-7, Δ2-8, Δ4-7 and Δ4-8 deletions.pt_BR
dc.identifier.vinculationAluno de Graduaçãopt_BR
dc.degree.grantorUniversidade Federal Fluminensept_BR
dc.contributor.advisorcoBarbosa, Thayana da Conceição-
dc.degree.departmentInstituto Biomédicopt_BR
dc.degree.date2015-
dc.degree.localNiterói, RJpt_BR
dc.degree.cursoCurso de Biomedicinapt_BR
dc.publisher.departmentNiteróipt_BR
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