Caracterização das células linfoides regulatórias e do efeito imunomodulador da suplementação oral com vitamina D em camundongos mdx

Abstract

O camundongo mdx, modelo murino da Distrofia muscular de Duchenne, apresenta a ausência da proteína distrofina como nos humanos, porém, com um curso benigno da doença. Entretanto o diafragma do mdx apresenta inflamação que persiste ao longo de toda sua vida. Já em humanos, a doença é progressiva e fatal, sem tratamento eficaz conhecido até o momento. Este trabalho teve como objetivos caracterizar as células Treg e células B com possível fenótipo regulatório nos linfonodos axilar e braquial de drenagem, comparando as fases de intensa mionecrose (4 semanas, 4s) e de regeneração muscular (12 semanas, 12s). Também avaliamos o efeito da suplementação oral com vitamina D na lesão muscular do mdx. Os linfonodos axilar e braquial dos camundongos mdx com 12s apresentaram diminuição de linfócitos T CD4+ (p<0,01) e aumento de linfócitos Treg (p<0,05) quando comparados com o camundongo controle não distrófico C57BL/10. Na fase de regeneração (12s) também foi observado aumento de células B com fenótipos regulatórios CD21hiCD1dhi/CD19+IgMhi (p<0,01) e CD19+CD138+ (p<0,05), além do aumento de mRNA para a citocina IL-10 (p<0,05). A cocultura de células T CD4+CD25- estimuladas com anti-CD3 com células B220+, isoladas dos linfonodos de camundongos com 12s, demostrou que as células B de mdx induziram o aumento de células com o fenótipo Treg (p<0,05) quando comparada com células de animais controle. Este dado sugere a presença de uma população de células B com papel imunoregulatório nos linfonodos drenantes do músculo distrófico nessa fase da doença. O papel da vitamina D na indução de células T regulatórias e diminuição da inflamação vem sendo investigado há alguns anos. A fim de analisar sua função imunoregulatória no microambiente da lesão muscular foram realizados protocolos de suplementação por via oral com 1α,25-diidroxicolecalciferol (100ng/mL ou 200ng/mL), 1 ou 2 vezes/semana durante seis semanas, dos camundongos mdx a partir do 21º dia de idade. A suplementação oral com 200ng/mL (1x/semana) induziu o aumento do número de células Treg (p<0,05) nos linfonodos de drenagem, com diminuição da quantidade de células musculares centro-nucleadas e o aumento da atividade das proteases MMP-2 e - 9 no diafragma. Entretanto, o tratamento não alterou a proporção de células B maduras não ativadas, nem das células fenótipo regulatório. Esses dados sugerem que estratégias que induzam a modulação de células envolvidas no processo inflamatório podem auxiliar no controle da lesão muscular nessa distrofinopatia