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Title: Caracterização das células linfoides regulatórias e do efeito imunomodulador da suplementação oral com vitamina D em camundongos mdx
Authors: Gama, Jaciara Fernanda Gomes
metadata.dc.contributor.advisor: Lagrota-Cândido, Jussara Machado
Vasconcellos, Rita de Cássia dos Santos
Quírico-Santos, Thereza Fonseca
metadata.dc.contributor.members: Quírico-Santos, Thereza Fonseca
Verícimo, Maurício Afonso
Nóbrega, Alberto Félix Antônio da
Pinho, Maria de Fátima Brandão
Riederer, Ingo
Silva, Andrea Alice da
Silva, Maria Fernanda de Souza Costa
Pinto, Luzia Maria de Oliveira
Lagrota-Cândido, Jussara Machado
Vasconcellos, Rita de Cássia dos Santos
Issue Date: 2020
Citation: Gama, Jaciara Fernanda Gomes. Caracterização das células linfoides regulatórias e do efeito imunomodulador da suplementação oral com vitamina D em camundongos mdx. 2020. 90f. Tese (Doutorado em Ciências e Biotecnologia) - Instituto de Biologia, Universidade Federal Fluminense, Niterói, 2020.
Abstract: O camundongo mdx, modelo murino da Distrofia muscular de Duchenne, apresenta a ausência da proteína distrofina como nos humanos, porém, com um curso benigno da doença. Entretanto o diafragma do mdx apresenta inflamação que persiste ao longo de toda sua vida. Já em humanos, a doença é progressiva e fatal, sem tratamento eficaz conhecido até o momento. Este trabalho teve como objetivos caracterizar as células Treg e células B com possível fenótipo regulatório nos linfonodos axilar e braquial de drenagem, comparando as fases de intensa mionecrose (4 semanas, 4s) e de regeneração muscular (12 semanas, 12s). Também avaliamos o efeito da suplementação oral com vitamina D na lesão muscular do mdx. Os linfonodos axilar e braquial dos camundongos mdx com 12s apresentaram diminuição de linfócitos T CD4+ (p<0,01) e aumento de linfócitos Treg (p<0,05) quando comparados com o camundongo controle não distrófico C57BL/10. Na fase de regeneração (12s) também foi observado aumento de células B com fenótipos regulatórios CD21hiCD1dhi/CD19+IgMhi (p<0,01) e CD19+CD138+ (p<0,05), além do aumento de mRNA para a citocina IL-10 (p<0,05). A cocultura de células T CD4+CD25- estimuladas com anti-CD3 com células B220+, isoladas dos linfonodos de camundongos com 12s, demostrou que as células B de mdx induziram o aumento de células com o fenótipo Treg (p<0,05) quando comparada com células de animais controle. Este dado sugere a presença de uma população de células B com papel imunoregulatório nos linfonodos drenantes do músculo distrófico nessa fase da doença. O papel da vitamina D na indução de células T regulatórias e diminuição da inflamação vem sendo investigado há alguns anos. A fim de analisar sua função imunoregulatória no microambiente da lesão muscular foram realizados protocolos de suplementação por via oral com 1α,25-diidroxicolecalciferol (100ng/mL ou 200ng/mL), 1 ou 2 vezes/semana durante seis semanas, dos camundongos mdx a partir do 21º dia de idade. A suplementação oral com 200ng/mL (1x/semana) induziu o aumento do número de células Treg (p<0,05) nos linfonodos de drenagem, com diminuição da quantidade de células musculares centro-nucleadas e o aumento da atividade das proteases MMP-2 e - 9 no diafragma. Entretanto, o tratamento não alterou a proporção de células B maduras não ativadas, nem das células fenótipo regulatório. Esses dados sugerem que estratégias que induzam a modulação de células envolvidas no processo inflamatório podem auxiliar no controle da lesão muscular nessa distrofinopatia.
metadata.dc.description.abstractother: Mdx mice, a murine model of Duchenne muscular dystrophy, resemble human lack of functional dystrophin, but display a more benign disease course. However, the mdx diaphragm has inflammation that persists throughout life. In contrast, human disease is progressive and fatal, with no effective treatment known to date. Inflammation plays an important role in both disease pathogenesis and dystrophic muscle repair. This study aimed to characterize Treg and B cells with possible regulatory phenotype in the axillary and brachial lymph nodes, comparing the phases of intense myonecrosis (4 weeks, 4w) and muscle regeneration (12 weeks, 12w). We also evaluated the effect of oral vitamin D supplementation on the mdx muscle injury. The axillary and brachial lymph nodes of the mdx at 12w showed a decrease in CD4+ T lymphocytes (p<0.01) and an increase in Treg lymphocytes (p <0.05) when compared to the non-dystrophic control mouse C57BL/10. In the regeneration phase (12w) there was also an increase in B cells with regulatory phenotype CD21hiCD1dhi/CD19+ IgMhi (p <0.01) and CD19+CD138+ (p<0.05) phenotypes, in addition to an increase in mRNA for the immunoregulatory cytokine IL-10 (p<0.05). Coculture CD4+CD25+ effector T cells stimulated with anti-CD3 and B220+ B cells isolated from lymph nodes from 12 weeks mice, showed that mdx B cells were able to induce the increase of cells with the Treg phenotype (p<0.05), when compared to B cells from control animals. This data suggests the presence of a B population with an immunoregulatory role in the draining lymph nodes of the dystrophic muscle at this phase of the disease. The role of vitamin D as an important inducer regulatory T cells and reducing inflammation has been investigated. To analyze it immunoregulatory role in the muscle injury microenvironment, supplementation protocols were performed orally with 1α, 25 dihydroxycholecalciferol (100ng/mL or 200ng/mL), 2 or 1 times/week for six weeks, respectively in mdx mice from the 21st day of age. Oral supplementation with 200ng/mL (1x/week) induced an in the Treg cells increase percentual (p<0.05) in the draining lymph nodes, with a decrease in the amount of centronucleated muscle cells and an increase in the activity of MMP-2 proteases and -9 on the diaphragm. However, the treatment did not change the mature B cells proportion and regulatory phenotype of B cells. These data suggest that strategies that induce the modulation of cells involved in the inflammatory process may help to control muscle damage in that dystrophinopathy.
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/21721
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