Mapeamento imunológico de cinco proteínas de Leptospira interrogans para o desenvolvimento de testes diagnósticos IgM E IgG específicos

Abstract

A notificação de casos de Leptospirose no mundo vem crescendo anualmente, entretanto no Brasil tem se mantido com cerca de 3.600 casos/ano e recrudesce quando existem catástrofes ambientais. Quando diagnosticada rapidamente pode ser tratada adequadamente, contudo o diagnóstico incorreto pode levar a lesões renais e hepáticas graves e ao óbito. A dificuldade diagnóstica laboratorial ocorre por falta de um teste específico e sensível. O teste diagnóstico ainda utilizado em muitos países é o de aglutinação microscópica (MAT) e pesquisa de Leptospira. Apesar destes testes não serem específicos e apresentarem baixa sensibilidade, ainda são recomendados e distribuídos pelo Ministério da Saúde no Brasil (MS/Brasil). Visando identificar estruturas antigênicas que possam contribuir para o desenvolvimento de testes de diagnósticos rápidos e específicos, os epitopos IgM e IgG de 5 proteínas de Leptospira interrogans (Lip32, Lip41, Lp49, ICD e Lpsinal) foram mapeadas, utilizando a técnica de microarranjo de peptídeos por Spot-synthesis. Um total de 112 epítopos majoritários foram identificados (54 IgM e 58 IgG) e destes 33 compartilhavam reatividade tanto IgM quanto IgG. Após eliminação dos epítopos que apresentaram reação cruzada, cinco epitopos (Lip32/05-M, Lip32/11-M, Lip41/02-M, Lip41/03-M, Lip41/06-M), considerados específicos por análise in silicos e reatores tanto para IgM quanto IgG foram selecionados. Uma análise por modelagem molecular, mostrou que estes epitopos estavam dispostos na superfície molecular, portanto acessíveis ao solvente. Dois destes epitopos foram selecionados e sintetizadas quimicamente (Lip32/05-M e Lip41/02-M) sob forma de peptídeos multiantigênicos (MAP4) e analisadas por ELISA com um painel de soros de pacientes saudáveis e com doenças não relacionadas. Os resultados da curva ROC, mostraram que os peptídeos apresentaram uma lata sensibilidade (100%) e especificidade (100%) com ótimo desempenho (p<0.05), indicando assim, que estes peptídeos são elegíveis para passarem para estudos de fase 2 de desenvolvimento de um teste diagnóstico específico para Leptosirose.