Determinação do DNA circulante e mutação c.35g>c no gene KRAS de pacientes com glioma maligno em tratamento com o monoterpeno álcool perílico

Abstract

Introdução: Gliomas são os tumores primários malignos mais frequentes do sistema nervoso central. O gene KRAS exerce um papel crucial na regulação das vias de sinalização intracelular, tanto que a mutação funcional pode causar transformação maligna e progressão tumoral. Objetivo: Determinar a frequência da mutação c.35G>C no gene KRAS em amostras de DNA de pacientes com glioma maligno e tumor sólido em tratamento com o monoterpeno álcool perílico (POH), um inibidor da p21Ras. Material e Métodos: A coorte incluiu 218 pacientes com glioma maligno recidivo e 65 pacientes com tumor sólido cadastrados no estudo clínico Fase I/II do tratamento com POH pela via inalatória e 330 indivíduos saudáveis como controle pareado. Análise da mutação c.35G>C no gene KRAS por PCR real-time foi feita no DNA circulante (cfDNA) do soro e/ou plasma, e DNA genômico (gDNA) de células sanguíneas, saliva e de fragmentos parafinados da lesão tumoral. Fragmentos parafinados de biopsia do tumor de 36 pacientes com glioma foram corados por imunohistoquímica para proteína oncogênica p21WAF1 inibidora da ciclina/cdk e o marcador de proliferação celular Ki 67. Os dados foram analisados por testes não paramétricos de Wilcoxon-Mann-Whitney e Kruskal-Wallis para determinação da significância (p<0,05). Resultados: Pacientes com glioma e tumor sólido apresentaram níveis elevados de cfDNA quando comparados com os indivíduos saudáveis. Porém, os controles negativos apresentaram níveis mais elevados de gDNA do que pacientes com glioma. Não se observou a presença de mutação c.35G>C KRAS nas amostras analisadas de pacientes com glioma e tumor sólido. Contudo, foi observada uma relação inversa na porcentagem de positividade de p21WAF1 e a imunomarcação para proliferação celular Ki67. Discussão: O nivel de cfDNA nos processos neoplásicos apresenta uma estreita relação com a atividade da doença e prognóstico. A ausência de mutação somática c.35G>C KRAS nas amostras analisadas sugere ser esta uma via importante na regulação da proliferação tumoral. De fato, o aumento na proliferação celular evidenciado pelo percentual elevado de Ki-67 estava associado com redução na positividade para p21WAF1. Conclusão: A análise sequencial do cfDNA mostrou que pacientes com glioma com boa resposta ao tratamento apresentaram diminuição nos níveis de cfDNA e maior sobrevida. Isto indica que cfDNA pode ser usado no monitoramento do tratamento antecipando uma possível recidiva da doença. A mutação KRAS c.35G>C parece não influenciar na progressão do glioma maligno e nem na resposta ao tratamento com o monoterpeno POH. Contudo é possível que ativação em outras vias de sinalização intracelular e/ou outra mutação somática possa estar influenciando na acentuada proliferação celular e inibição da supressão tumoral