Análise da expressão dos componentes do sistema endocanabinoide no modelo murino de retinose pigmentar

Abstract

A retinose pigmentar (RP) é uma doença neurodegenerativa hereditária, causada pela degeneração de células fotorreceptoras da retina, levando à perda progressiva da visão. Estudos têm mostrado que o sistema endocanabinoide desempenha um papel importante na regulação da função visual e na proteção da retina contra danos. Em particular, a ativação dos receptores CB1 e CB2, assim como a inibição de enzimas de degradação, como a FAAH, pode ter efeito neuroprotetores e anti-inflamatórios na retina, o que pode atuar em doenças como a RP. Diante dessas descobertas, o objetivo do trabalho foi analisar o possível efeito neuroprotetor do bloqueio in vivo da FAAH, na retina do modelo murino de RP, PDE6βRD10/RD10(RD10), além de analisar expressão dos componentes do sistema endocanabinoide em tecidos retinianos saudáveis e em animais RD10. Para a análise do bloqueio enzimático, foi realizado o tratamento agudo com injeção intravítrea do fármaco URB597, nas concentrações de 30 nM e 100 nM, aplicando 1μl em cada olho do animal em P18. Após sobrevida de 24h, foi feito a retirada da retina desses animais, o material histológico foi processado e foi quantificado o número de fotorreceptores, através de imunomarcação para recoverina na camada nuclear externa do centro à periferia da retina e análise da espessura desta camada. Para identificarmos e quantificarmos o número de fotorreceptores em apoptose foi realizado o método de análise de TUNEL. Para análise dos componentes endocanabinoides, foi realizada a técnica de imunofluorescência para identificar os receptores CB1 e CB2 e FAAH na retina de animais Bl6 e RD10 em diferentes idades. Com isto observamos que o bloqueio agudo da FAAH in vivo com UBR597, na concentração de 100 nM, parece aumentar o número de fotorreceptores e diminuir o número de células em apoptose. Na análise dos componentes endocanabinoides foi possível observar a presença do receptor CB1 nas camadas nucleares, diferente do visto em animais saudáveis, que apresentaram CB1R, principalmente, nas camadas de contato sináptico. O receptor CB2 nos animais RD10 foi identificado nos segmentos externos de fotorreceptores e nas camadas plexiformes por todo desenvolvimento. Já na idade P19, esse receptor foi observado na camada nuclear externa, o que difere do visto em Bl6. A expressão da enzima FAAH foi observada nos segmentos externos dos fotorreceptores e nas camadas de contato sináptico no tecido retiniano com degeneração, mas não nos animais Bl6