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Title: Avaliação da eficácia do Coproseco no diagnóstico da amebíase através de método morfológico (exame parasitológico de fezes) e molecular (multiplex-PCR)
Authors: Garcia, Mariana Coimbra
metadata.dc.contributor.advisor: Macedo, Heloisa Werneck de
metadata.dc.contributor.members: Peralta, Regina Helena Saramago
Neves, Felipe Piedade Gonçalves
Issue Date: 9-Nov-2017
Abstract: Os parasitos intestinais são importantes causadores de inúmeros prejuízos à saúde humana, estando relacionados principalmente às baixas condições sanitárias e higiênicas da população afetada. A amebíase é uma infecção causada por Entamoeba histolytica. Entretanto, a diferenciação entre Entamoeba histolytica e a Entamoeba dispar, espécies morfologicamente idênticas, é fundamental para a conduta terapêutica, prevenção da doença invasiva e para a saúde pública. O método que tem sido mais utilizado na rotina laboratorial é o exame parasitológico de fezes (EPF), que tem sua importância na demonstração dos parasitos por microscopia. Para elevar sua sensibilidade, foi lançado no mercado o Coproseco® (CM Medical Comercial Hospitalar Ltda), frasco coletor contendo formalina seca, que permite e garante tanto a aplicação de várias técnicas na mesma amostra como a boa conservação desta. Para o diagnóstico da amebíase o EPF continua sendo um método amplamente utilizado. Nesse método, a distinção entre E. histolytica e E. dispar só é possível quando trofozoítas hematófagos são observados, identificando assim a forma patogênica do complexo, E. histolytica. No entanto, para que tenha elevada sensibilidade, é necessário coleta e conservação adequada da amostra. Este trabalho teve como objetivos: (1) avaliar a eficácia do coletor fecal Coproseco® no diagnóstico da amebíase, comparando a eficácia deste coletor na conservação da morfologia de cistos das amebas do complexo E.histolytica/E. dispar em material fecal mantido nele durante 2, 5, 10, 20 e 30 dias; e (2) realizar a técnica de Multiplex-PCR para a diferenciação das espécies E. histolytica e E. dispar, com a utilização de sedimento obtido após o método de sedimentação espontânea em fezes frescas e conservadas por 2, 5, 10, 20 e 30 dias de pacientes diferentes. Foram avaliados pacientes atendidos no Hospital Universitário Antônio Pedro com pedido médico para exame parasitológico de fezes em amostra fresca, nos anos de 2008 e 2009. Não foi observada boa preservação na morfologia de cistos das amebas do complexo conservadas na formalina seca por mais de 48h. Das cinquenta e oito amostras analisadas pela Multiplex-PCR, 20 foram positivas para E. dispar, ocorrendo duas infecções duplas de E. histolytica/E. dispar. Na Multiplex-PCR, ocorreu amplificação apenas das amostras conservadas por até 10 dias. A preservação das estruturas características dos cistos das amebas do complexo Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar pela formalina seca, conservante presente no Coproseco® é ineficaz e interfere na coloração de hematoxilina férrica, o que dificulta o diagnóstico desta parasitose. Quanto a diferenciação do complexo Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar por Multiplex-PCR, o Coproseco® permite a distinção das espécies somente quando as fezes são conservadas por até 10 dias. Assim, o material conservado no Coproseco® mostrou-se eficaz para o EPF e para posterior análise por Multiplex-PCR somente quando as amostras são mantidas nele por dois dias.
metadata.dc.description.abstractother: The intestinal parasites are the main generators of several human health disturbs, being related most often to poor sanitary and hygienic conditions of the affected population. Amebiasis is an infection caused by Entamoeba histolytica. Meantime, the differentiation between Entamoeba histolytica and Entamoeba dispar, identical morphologic species, is fundamental to therapeutic conduct, to prevent the invasive disease and to public health. The most used method in laboratorial routine is parasite demonstration by microscopy. In order to amplify its sensibility collector flask with dry formalin, called Coproseco® (CM Medical Comercial Hospitalar Ltda), was launched in the market, it allows and guarantees the application of many techniques in the same sample and a good conservation of it. To diagnosis of amebiasis the parasite demonstration by microscopy continues largely used. In this method, the distinguish between E. histolytica and E. dispar is only possible when haematophagous trophozoites are observed, identifying that way the pathogenic form of the complex, E. histolytica. However, to have high sensibility, it’s necessary an adequate collect and conservation of the sample. This work had the following purpose: (1) evaluate the efficacy Coproseco® collector in amebiasis diagnosis, comparing its efficacy in conservation of amoebae cysts morphology of the complex E.histolytica/E. dispar, in fecal material maintained in it during 2, 5, 10, 20 and 30 days; and (2) realize Multiplex-PCR technique to distinguish E. histolytica and E. dispar species, using sediment obtained after spontaneous sedimentation method in fresh stool of different patients being conserved during 2, 5, 10, 20 and 30 days. We evaluated patients attended in Antonio Pedro University Hospital with doctor demand for EPF in fresh sample, in 2008 and 2009. Wasn’t observed good preservation amoebae cysts morphology of the complex conserved in dry formalin for more than 48 hours. Twenty of the fifty eight samples analyzed by Multiplex-PCR were positive to E. dispar, occurring two double infection of E. histolytica/E. dispar. In Multiplex-PCR, amplifications occurred in samples conserved for 10 days or less only. The preservation of characteristic structures of amoebae cysts from Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar complex by dry formalin, present in Coproseco® is ineffective and interferes in iron hematoxylin staining, that difficult the diagnosis. About the differentiation between the complex Entamoeba histolytica/Entamoeba díspar by Multiplex-PCR, Coproseco® allows to distinguish the species only when stools are conserved for 10 days or less. Thus, the preserved material was useful for the microscopy and for post Multipex-PCR analysis when the stool sample was kept in this collector flask for two days.
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/5197
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