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Title: Efeito do consumo de bebidas ricas em polifenóis sobre a concentração de enzimas antioxidantes e níveis relativos de rnam dos genes p53 e ATM em animais alimentados com dieta hiperlipídica
Authors: Ribeiro, Vania Mattoso
metadata.dc.contributor.advisor: Azeredo, Vilma Blondet de
metadata.dc.contributor.advisorco: Fonseca, Adenilson de Souza da
metadata.dc.contributor.members: Faller, Ana Luísa
Domingos, Josiane Roberto
Dias, Juliana Furtado
Percegoni, Nathércia
Issue Date: 2018
Publisher: Universidade Federal Fluminense
Abstract: Dietas hiperlipídicas levam ao aumento na geração de espécies reativas de oxigênio (EROS). Os polifenóis das uvas parecem reduzir os níveis de EROS e restaurar o equilíbrio redox, favorecendo a homeostase do sistema antioxidante enzimático, não enzimático e os níveis relativos dos genes p53 e ATM. Objetivo: Investigar os efeitos de bebidas ricas em polifenóis na atividade antioxidante enzimática, não-enzimática e nos níveis relativos de RNAm dos genes p53 e ATM em animais alimentados com uma dieta hiperlipídica. Metodologia: Ratas Wistar adultas foram divididas em cinco grupos (n=10): Grupo controle (GC) - dieta controle (4% de lipídio); Grupo hiperlipídico (GH) - dieta com 20% de lipídio; Grupo Suco de uva Tinto Integral (GSUTI) - 15 ml/dia de suco de uva + dieta rica em lipídio; Vinho tinto (GVT) - 10 ml/dia de vinho tinto + dieta rica em lipídio; Grupo Solução de Resveratrol (GSR) - 15 ml/dia de solução de resveratrol a 20% + dieta rica em lipídio. Após oito semanas, foram realizadas as eutanásias, o plasma foi submetido à avaliação da atividade antioxidante e amostras de tecido muscular esquelético e adiposo foram coletados e submetidos à análise de RT-qPCR. A atividade de SOD foi avaliada medindo-se a inibição da auto-oxidação de adrenalina, CAT pela taxa de redução em peróxido de hidrogênio e GPx monitorando a oxidação de NADPH. A atividade antioxidante não enzimática foi avaliada pelo método ORAC e DDPH no plasma dos animais. Concentração de fenólicos totais foi realizada através do método Folin-ciocalteau, conteúdo de trans-resveratrol por cromatografia líquida de alta eficiência e atividade antioxidante foi realizada por DPPH e ORAC em todas as bebidas. Resultados: GC e GSUTI apresentaram a menor atividade de GPx, apontando para um possível efeito protetor do suco de uva contra os efeitos da dieta hiperlipídica (p<0,05). GVT aumentou a atividade de CAT e GPx (p<0,05). A atividade de SOD e a atividade antioxidante não-enzimática foram semelhantes em todos os grupos. Quanto a p53, no tecido muscular, os níveis relativos de RNAm foram mais altos nos grupos GSUTI e GVT, e não no grupo SR, como esperado (p<0,001). No tecido adiposo, GSUTI apresentou os maiores níveis relativos de RNAm de p53 dentre todos os grupos (p<0,001). Os níveis relativos de ATM foram maiores no grupo GH, tanto no tecido adiposo quanto no tecido muscular (p<0,001). No tecido adiposo, bebidas ricas em polifenóis diminuíram os níveis relativos de RNAm de ATM quando comparados ao GH (p<0,001). No tecido muscular, GVT apresentou os menores níveis relativos de RNAm de ATM quando comparado ao GH (p<0,01). Conclusão: Neste modelo experimental, quanto à atividade enzimática antioxidante, o suco de uva mostrou ser o mais eficaz para minimizar os efeitos deletérios de uma dieta rica em gordura. Resveratrol não apresentou nenhum benefício adicional e o vinho tinto possivelmente apresenta efeito prejudicial devido a presença de etanol na bebida. Adicionalmente, o suco de uva e o vinho tinto revelaram-se os mais eficazes para aumentar os níveis relativos de RNAm de p53, possivelmente devido a um conjunto de compostos bioativos que atuam sinérgicamente. No entanto, dietas com alto teor de gordura, apesar de não alterar os níveis de p53, são capazes de aumentar os níveis relativos de RNAm de ATM, que são normalizados pelo consumo de polifenóis, principalmente no tecido adiposo
metadata.dc.description.abstractother: High fat diets lead to increased generation of reactive oxygen species (ROS). Grape polyphenols appear to reduce ROS levels and restore redox balance, favoring non-enzymatic and enzymatic antioxidant system homeostasis and p53 and ATM relative levels. Objetive: The aim of this study was to investigate the antioxidant properties of polyphenol-rich beverages in the enzymatic and non-enzymatic antioxidant activity and the relative mRNA levels of the p53 and ATM genes in animals fed a high fat diet. Methods: Adult Wistar rats were divided into five groups (n=10): Control group (CG) - control diet (4% lipid); Hyperlipid group (HF) – diet with 20% lipid; Group Grape Juice (GJ) - grape juice (15 ml/day) + high-fat diet; Red wine (RW) - red wine (10 ml/day) + high-fat diet; Group Resveratrol Solution (RS) – 15 ml/day of 20% resveratrol solution + high-fat diet. Eight weeks after euthanasia, the plasma was submitted to the evaluation of antioxidant activity and samples of skeletal and adipose tissues were submitted RT-qPCR analysis. SOD activity was assessed by measuring the inhibition of adrenaline auto-oxidation, CAT by the rate of reduction in hydrogen peroxide and GPx, monitoring the oxidation of NADPH. The non-enzymatic antioxidant activity was evaluated by the ORAC and DDPH method in animals´ plasma.Concentration of total phenolics was performed through Folin-ciocalteau method, trans-resveratrol content by high performance liquid chromatography and antioxidant activity was performed by DPPH in all beverages. Results: CG and GJ showed the lowest GPx activity, indicating a possible protective effect of grape juice against the effects of a high fat diet (p<0,05). GJ increased CAT activity when compared to RS (p<0,05). SOD activity and non-enzymatic antioxidant activity were similar in all groups. Regarding p53 and ATM genes, in muscle tissue, relative p53 mRNA levels were higher in the GJ and RW groups, and not in the RS group, as expected (p<0,001), when compared to HF group. In adipose tissue, GJ showed the highest relative levels of p53 mRNA (p<0,001) among all groups. The relative levels of ATM were higher in the HF group, both in adipose tissue and muscle tissue (p <0,001). In adipose tissue, polyphenol-rich beverages decreased the relative levels of ATM mRNA when compared to GHF (p<0,001). In muscle tissue, only the GJ group had lower relative levels of ATM mRNA when compared to HF (p <0,01). Conclusion: In this experimental model, in antioxidant enzymatic activity, grape juice was the most effective to minimize the deleterious effects of a high fat diet. Resveratrol did not showed any aditional benefit and red wine possibly shows a detrimental effect due to ethanol content. In addition, grape juice and red wine have proven to be the most effective in increasing relative p53 mRNA levels, possibly due to a set of bioactive compounds that acts synergistically. However, high fat diets, although it did not alter p53 levels, are able to increase the relative levels of ATM mRNA, which are normalized by the consumption of polyphenols, mainly in adipose tissue
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/6898
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