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Title: Padronização do ensaio imunoenzimático para determinação do índice de avidez de anticorpos IgG gerados em camundongos imunizados com a proteína recombinante LigA(625-1224aa) de Leptospira interrogans
Authors: Boroto, Kamilla Féres
metadata.dc.contributor.advisor: Esteves, Gabriela dos Santos
metadata.dc.contributor.advisorco: Medeiros, Marco Alberto
Issue Date: 2015
Publisher: Universidade Federal Fluminense
Abstract: A leptospirose é uma enfermidade cosmopolita grave que acomete diferentes espécies de animais domésticos, silvestres e o homem. As vacinas convencionais baseadas na célula inteira inativada contra leptospirose, tanto para uso humano quanto veterinário, possuem sucesso limitado, pois induzem imunidade de curta duração e proteção sorovar-específica. Para vacinas constituídas por peptídeos e peptídeos recombinantes necessitam que sejam utilizados adjuvantes em suas vacinas por possuir baixa imunogenicidade. Os adjuvantes podem promover resposta celular ou humoral, e, no caso desse trabalho onde foram avaliadas formulações contendo Hidróxido de Alumínio, a principal resposta imunológica gerada é a humoral. Os anticorpos gerados a partir desta resposta necessitam que sua qualidade seja avaliada. Para tal, o teste de avidez, baseado no ensaio imunoenzimático, foi padronizado utilizando o agente caotrópico, Tiocianato de Amônio. Testamos a interferência desse agente quanto a ligação do antígeno em placa de 96 poços, e foi observado que concentrações menores que 1M não interferiam nesta ligação. Diante disso, para determinação do índice de avidez, foi estabelecida uma concentração onde o agente caotrópico diminuísse em 50% a ligação entre o anticorpo presente no soro padrão e o antígeno fixado na placa. A concentração estabelecida foi a de 0,4M e a partir dela houve a determinação da faixa do índice de avidez (41,39 a 53,72%) dos anticorpos produzidos com a formulação contendo LigA(625-1224aa) e Hidróxido de Alumínio. Em nosso estudo essa avaliação é uma ferramenta de extrema importância que serve como parâmetro para determinação do potencial dessa formulação em ensaios de desafio com Leptospiras vivas, que serão realizados futuramente.
metadata.dc.description.abstractother: Leptospirosis is a serious cosmopolitan disease affecting different species of domestic animals, wildlife and humans. The conventional vaccines based on inactivated whole cell against leptospirosis, both for veterinary and human use, have limited success, because they induce short and serovar-specific protective immunity. Vaccines consisting of recombinant peptides and peptides are required to use adjuvants in their formulations because of their low immunogenicity. Adjuvants can promote cellular or humoral response and in this work were evaluated formulations containing Aluminum hydroxide, generate and the primary immune response generated is humoral. The quality of response generated from the antibodies need to be evaluated. To this end, the avidity test based on enzyme-linked immunosorbent assay was standardized using the chaotrope agent Ammonium thiocyanate. We tested the agent interference such as antigen binding in a 96 well plate, and we observed that the concentrations below 1M do not interfere in the linkage. Thus, to determine the avidity index, it was necessary to stabilish the chaotropic agent concentration to decrease 50% on binding between the antibody present in standard serum and the antigen fixed on the plate. The determined concentration of Amonium tiocyanate was 0.4M and consequently the determination of the avidity index range of 41.39 to 53.72% of the antibodies produced with the formulation containing LigA(625-1224aa) and Aluminum hydroxide. In our study, this evaluation is an extremely important tool that serves as a parameter to determine the potential of this formulation challenge tests with live Leptospira, which will be held in the future.
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/7811
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