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Title: Aspectos Proteômicos na Esponja Haliclona SP. Submetida ao estresse pelo cádmio para aplicações ambientais
Authors: Wanick, Rodrigo Cunha
metadata.dc.contributor.advisor: Santelli, Ricardo Erthal
metadata.dc.contributor.advisorco: Coutinho, Cristiano Carvalho
metadata.dc.contributor.members: Machado, Wilson Thadeu Valle
Cordeiro, Renato Campello
Moreira, Josino Costa
Arruda, Marco Aurélio Zezzi
Issue Date: 2012
Abstract: Neste trabalho foi utilizada a esponja Haliclona sp. cultivada em laboratório como matriz biológica para avaliar possíveis respostas moleculares causadas pela exposição ao Cd2+ em diferentes tempos de exposição. Técnicas de eletroforese 1D em amostras derivatizadas com monobromobimano e 2D aliada a identificação por espectrometria de massas (ESI-QTOF-MS) foram utilizadas para identificar a expressão de proteínas diferencialmente expressas entre a condição controle e a de exposição. Além disso, técnicas de histologia foram utilizadas para evidenciar morfologicamente possíveis efeitos causados pela exposição ao metal. O maior acúmulo de Cd2+ foi observado no tempo de 326 horas. Além disso, resultados da histologia e de eletroforese 1D também mostraram maiores danos celulares e maior indução de uma proteína de baixa massa e rica em grupamentos -SH neste tempo de exposição. Com a utilização da eletroforese 2D foi possível detectar 46 spots proteicos diferencialmente expressos nas amostras do tempo de 326 horas. A utilização de duas distintas etapas de extração de proteínas apresentou diferenças quanto ao número e intensidade dos spots detectados. A etapa de precipitação por solvente apresentou um maior número de spots enquanto que a desnaturação térmica apresentou uma maior intensidade. A utilização da espectrometria de massas aliada a ferramenta de bioinformática blastp foi capaz de identificar 17 proteínas relacionadas à esponjas (24%), fungos (29%) e bactérias (47%). Dentre as proteínas identificadas, podem ser destacadas as proteínas relacionadas as funções de proliferação e diferenciação celular, obtenção de energia e, principalmente, as proteínas relacionadas ao estresse oxidativo. A identificação de um maior número de proteínas diferencialmente expressas, auxiliados pelos resultados histológicos, foi capaz de indicar os efeitos causados pela exposição ao Cd+2 na esponja, demonstrando o potencial uso dessas respostas moleculares em Haliclona sp. como ferramenta na avaliação da contaminação deste metal em ambientes marinhos costeiros.
metadata.dc.description.abstractother: In this work we used the cultivated marine sponge Haliclona sp. as a biological matrix to evaluate molecular responses caused by Cd2+ exposure in different times. The separation by 1D-PAGE using sponge samples labeling with monobromobimane and 2D-PAGE allied with the mass spectrometry (ESI-QTOF-MS) were used to identify differentially expressed proteins between control and exposure conditions. Furthermore, histological techniques were used to show morphological effects caused by exposure to this metal. The largest accumulation of Cd2+ was observed at the 326 hours. In addition, histology and 1D-PAGE results showed also a greater cell damage and induction of a low-molecular-mass and SH-rich protein in this exposure time. With the use of 2D-PAGE was possible to detect differentially expressed in 46 spots proteins in the 326 hours samples. The use of two distinct steps of protein extraction showed differences in number and intensity of spots detected. The solvent precipitation step had a greater number of spots while the heat denaturation had a greater intensity. The use of mass spectrometry together blastp bioinformatics tool was able to identify 17 proteins related to the sponge (24%), yeast (29%) and bacteria (47%). Among these identified proteins, these ones could be related to the functions as cell proliferation and differentiation, energy obtaining and, especially, repair to oxidative stress functions. The identification of differentially expressed proteins together by the histological results, was able to indicate the effects in marine sponge caused by exposure to Cd+2, indicating the potential use of these molecular responses in Haliclona sp. as a tool to evaluation of metal contamination in marine coastal environments.
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/8536
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