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Title: Influência de polimorfismos genéticos sobre a atividade da enzima hidroximetilbilano sintase
Authors: Gonzaga, Ana Denise Gomes
metadata.dc.contributor.advisor: Ribeiro, Georgina Severo
metadata.dc.contributor.members: Amorim, Lídia Maria da Fonte de
Domingos, Cláudia Regina Bonini
Urmenyi, Turan Peter
Issue Date: 2009
Citation: GONZAGA, Ana Denise Gomes. Influência de polimorfismos genéticos sobre a atividade da enzima hidroximetilbilano sintase. 2009. 155 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal Fluminense, Niterói, 2009.
Abstract: A porfiria aguda intermitente, uma doença autossômica dominante, resulta da redução da atividade de uma enzima que participa da via biossintética do heme, a hidroximetilbilano sintase. A doença pode ser diagnosticada por métodos bioquímicos, por meio da detecção do aumento da produção e da excreção de precursores das porfirinas na urina, por meio da determinação da atividade enzimática por espectrofotometria e espectrofluorimetria e por métodos moleculares. Um estudo piloto revelou que os valores da atividade da hidroximetilbilano sintase se sobrepõem em indivíduos normais e portadores de porfiria aguda intermitente. Neste estudo, foram avaliados 80 doadores do Banco de Sangue do Hospital Universitário Antônio Pedro e 124 indivíduos de quatro famílias com histórico de porfiria aguda intermitente. O objetivo principal foi avaliar a influência de polimorfismos genéticos sobre a expressão fenotípica da hidroximetilbilano sintase.Os objetivos específicos foram estudar a freqüência dos polimorfismos genéticos no gene e analisar se estes polimorfismos apresentam alguma influência sobre a redução da atividade da hidroximetilbilano sintase. Anteriormente, amostras de sangue total foram coletadas para isolamento do DNA genômico pelo método de precipitação salina e avaliação da atividade enzimática no hemolisado, que foi quantificada por espectrofotometria e por espectrofluorimetria. Os indivíduos foram classificados em deficientes e não deficientes por valores de referência estabelecidos nestes métodos. As famílias com histórico de porfiria aguda intermitente tiveram a mutação definida por PCR-SSCP e seqüenciamento em um estudo anterior. Os portadores foram identificados no padrão SSCP. Foram analisados os polimorfismos C2377A (Apa LI), A2478G (Bst NI), G1345A (Msp I) e T1500C (Pst I) no intron 1; A3581G (Bsm AI) no intron 3 e C7064A (Hinf I), no intron 10, no gene que codifica a enzima hidroximetilbilano sintase, por PCR-RFLP. No grupo de doadores de sangue, as freqüências alélicas para os seis polimorfismos foram semelhantes àquelas encontradas na população geral. Ao comparar a distribuição alélica entre as famílias e os doadores, houve diferença significativa para os seis polimorfismos na família D, para os polimorfismos G1345A, A3581G e C7064A na família B e A2478G e G1345A na família SP. A distribuição dos genótipos dos polimorfismos C2377A, A2478G, G1345A, A3581G e C7064A em famílias com histórico de porfiria aguda intermitente foi significativamente diferente da distribuição encontrada para os doadores de sangue, indicando que estes polimorfismos podem ser considerados marcadores genéticos para estas famílias. O alelo A do polimorfismo C7064A apresentou a freqüência de 59% na família B e segregou com a mutação L338P, causadora da doença nesta família. A distribuição genotípica e alélica dos polimorfismos C2377A, A2478G e T1500C variou nos grupos deficientes e não deficientes enzimáticos, de forma que estes polimorfismos contribuíram para o fenótipo redução da atividade enzimática. A distribuição dos polimorfismos encontrada nas famílias com histórico da doença, não contribui para explicar a sobreposição da atividade enzimática em portadores e não portadores de doença
metadata.dc.description.abstractother: Acute intermittent porphyria, an autosomal dominant disease, results from the halfnormal activity of the heme biosynthetic enzyme, hydroxymethylbilane synthase. The disease can be diagnosed by biochemical methods, through the detection of the increase in production and excretion of precursors of porphyrins in urine, through the determination of enzymatic activity by spectrophotometric and spectrofluorometric assays and molecular methods. A pilot study revealed that the values of the activity of hydroxymethylbilane synthase overlap in normal individuals and patients with acute intermittent porphyria. In this study, were evaluated 80 donors of Blood Bank of the University Hospital Antonio Pedro and 124 individuals of four families with a history of acute intermittent porphyria. The main objective was to evaluate the influence of genetic polymorphisms on the phenotypic expression of hydroxymethylbilane synthase. The frequency of genetic polymorphisms in gene was studied and was examined whether these polymorphisms present some influence on the reduction of activity of hydroxymethylbilane synthase. Previously, whole blood samples were collected for isolation of genomic DNA by the method of precipitation saline and evaluation of enzyme activity in hemolysate, which was quantified by spectrophotometric and spectrofluorometric assays. Subjects were classified in disabled people and not disabled by reference values established in these methods. Families with historic of acute intermittent porphyria had mutations defined by PCRSSCP and sequencing in a previous study. The carriers were identified in the pattern SSCP. The polymorphisms C2377A (Apa LI), A2478G (Bst NI), G1345A (Msp I) and T1500C (Pst I) in intron 1; A3581G (Bsm AI) in intron 3 and C7064A (Hinf I), in intron 10, in the gene that encodes the enzyme hydroxymethylbilane synthase were analyzed by PCR-RFLP. In the group of blood donors, the allelic frequencies for the six polymorphisms were similar to those found in the general population. In comparing the allelic distribution between families and donors, significant difference for the six polymorphisms in the family D, polymorphisms G1345A, A3581G and C7064A in family B and A2478G and G1345A in family SP. The distribution of genotypes of polymorphisms C2377A, A2478G, G1345A, A3581G and C7064A in families with a history of acute intermittent porphyria was significantly different distribution found for blood donors, indicating that these polymorphisms may be considered as genetic markers for these families. The allele of polymorphism C7064A presented the frequency of 59% in the family B and segregated with mutating L338P, causing the disease in this family. The allele of polymorphism C7064A presented the frequency of 59% in the family B and segregated with mutation L338P, causing the disease in this family. The genotypic and allelic distribution polymorphisms C2377A, A2478G and T1500C varied in groups disabled and non enzymatic disabled, so that these polymorphisms contributed to the phenotype reduction in the enzymatic activity. The distribution of polymorphisms found in families with a history of the disease, did not contribute to explain the overlap of enzyme activity in carriers and not disease carriers. activy, AIP
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/9429
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