Validação da técnica das molduras adesivas para a quantificação dos neurofibromas discretos e estudo da influência dos hormônios progesterona e 17β–estradiol no número e tamanho destes tumores provenientes de indivíduos com neurofibromatose tipo 1

Abstract

neurofibromas cutâneos e subcutâneos, também denominados discretos, uma das suas principais manifestações clínicas. Apesar do número e tamanho dos neurofibromas serem bastante variáveis na NF1, uma técnica objetiva para quantificar estes múltiplos tumores inexiste. É sabido que os neurofibromas discretos surgem na puberdade e alteram-se na gravidez. Assim, a progesterona e o estrogênio têm sido os hormônios mais investigados. A maioria dos neurofibromas expressa o receptor da progesterona (RP), porém a minoria expressa o receptor do estrogênio (RE). A presença de polimorfismos em genes de receptores hormonais aumenta a expressão destas proteínas em algumas neoplasias, sendo que esta relação nunca foi investigada na NF1. Ademais, estudos envolvendo os níveis séricos hormonais são escassos. Objetivos Gerais: Validar a técnica das molduras adesivas para estimar o número de neurofibromas discretos. Investigar a relação dos hormônios progesterona e 17β-estradiol com o número e tamanho destes neurofibromas associados à Neurofibromatose tipo 1. Material e Métodos: O presente trabalho foi dividido em duas etapas, ambas compostas por 92 indivíduos com NF1. ETAPA 1: Os neurofibromas discretos foram quantificados pela técnica das molduras adesivas em 92 indivíduos e, em 49 indivíduos, foi realizada a contagem exata “um a um” destes tumores com o intuito de avaliar a capacidade preditiva da técnica. O coeficiente de correlação intraclasse (CCI), teste t pareado e gráficos de Bland-Altman e concordância-sobrevivência foram aplicados na análise interexaminador (dois avaliadores) da técnica, sendo a correlação de Spearman e regressão linear usados para avaliar a representatividade da técnica das molduras adesivas. ETAPA 2: Cada indivíduo foi submetido à coleta de sangue e biópsia de dois neurofibromas discretos: o maior e o menor. A avaliação da expressão dos anticorpos RP, RE e Ki-67 (índice de proliferação celular) foi realizada pela técnica da imuno-histoquímica em cortes obtidos do tissue microarray (TMA) e tissue macroarray (TMaA). A imunoquantificação foi feita através do sistema computadorizado da Aperio (Leica Byosistem, EUA). O polimorfismo genético foi identificado pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Os níveis séricos hormonais foram avaliados pelo ensaio de imunoabsorbância ligado à enzima. A significância estatística aceita foi de p ≤ 0,05. Resultados: Considerando a ETAPA 1, houve excelente concordância entre os avaliadores (CCI = 0.995) e o número total de neurofibromas discretos pode ser predito pela técnica das molduras adesivas através da fórmula: 38,6 + 10,3x. Na ETAPA 2, os níveis séricos do hormônio progesterona foram associados positivamente com o número de neurofibromas discretos. A expressão do RP foi identificada em 100% dos neurofibromas. O RE foi positivo em apenas 4% dos tumores. A expressão do RP foi associada ao índice de proliferação celular, estando presente de forma significativa nos neurofibromas subcutâneos. Conclusão: A técnica das molduras adesivas prediz adequadamente o número de neurofibromas discretos na NF1. A progesterona tanto apresenta associação positiva com o número de neurofibromas, como seu receptor é correlacionado com o maior índice de proliferação celular e tipo clínico de tumor, demonstrando sua influência (hormônio e receptor) nos neurofibromas