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Title: Caracterização do sistema endocanabinoide em células de retinoblastoma humano
Authors: Paiva, Adrielle Christina Silva de
metadata.dc.contributor.advisor: Madeira, Lucianne Fragel
metadata.dc.contributor.members: Pandolfo, Pablo
Pereira, Luana de Almeida
Issue Date: 2018
Publisher: Universidade Federal Fluminense
Abstract: O retinoblastoma é o tumor maligno intraocular infantil mais comum, que acomete células da retina, levando a cegueira. O sistema endocanabinoide já foi mostrado como um sistema neuromodulatório muito promissor no tratamento de tumores. Logo, estabelecer uma relação modulando o mesmo poderia interferir no prognóstico do retinoblastoma. Este sistema é composto principalmente pelos dois receptores clássicos, o receptor canabinoide tipo 1 e 2 (rCB1 e rCB2), seus ligantes endógenos, anandamida (AEA) e o 2-araquidonoil glicerol (2-AG), suas enzimas de síntese fosfolipase D (PLD) e DAG-lipase (DAGL) e por fim, suas enzimas de degradação amido hidrolase de ácidos graxos (FAAH) e monoacilglicerol lipase (MAGL). A superfamília de receptores de potenciais transitório (TRPs) está intimamente relacionada ao sistema canabinoide, especificamente o receptor de potencial transitório anquirina tipo 1 (TRPA1) um canal catiônico não seletivo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar a presença dos receptores CB1, CB2, TRPA1 e a enzima FAAH em cultura de células da linhagem Y79 de retinoblastoma humano. As células Y79 foram cultivadas em garrafas de 25 cm2 em meio RPMI 1640 suplementado com 10% soro fetal bovino, 1% L-glutamina, 100 U/ml penicilina e 100 μg/mL estreptomicina à 37ºC em uma atmosfera com 5% CO2. As células foram mantidas em suspensão com a concentração máxima de 2x106 células/ mL. Verificamos uma intensa marcação por imunofluorescência para os receptores CB1, CB2 e TRPA1, localizados na região peri-citoplasmática das células Y79. Entretanto, não conseguimos detectar a enzima FAAH. Para confirmar estas expressões foi realizado o western blot, resultando na presença de todos os componentes supracitados. A caracterização dos componentes do sistema canabinoide nesta linhagem de células de retinoblastoma possibilita maiores estudos sobre o tema, permitindo também estabelecer uma possível intervenção terapêutica futuramente.
metadata.dc.description.abstractother: Retinoblastoma is the most common childhood intraocular malignancy, which affect retinal cells leading to blindness. Endocannabinoid system has already been shown as a very promising neuromodulatory system for the treatment of tumors. Therefore, establishing a relationship to modulating it could interfere with prognosis of retinoblastoma. This system is composed mainly by two classical receptors, cannabinoid receptor type 1 and 2 (CB1R and CB2R), its endogenous ligands anandamide (AEA) and 2-arachidonoyl glycerol (2-AG), its synthesis’ enzymes, phospholipase D (PLD) and DAG-lipase (DAGL) and, finally, their degradation enzymes, fatty acid amide hydrolase (FAAH) and monoacylglycerol lipase (MAGL). The superfamily of transient potentials receptors (TRPs) is closely related to cannabinoid system, specifically transient potential receptor ankyrin type 1 (TRPA1) a non-selective cation channel. Therefore, the objective of this study was to evaluate the presence of CB1, CB2, TRPA1 receptors and FAAH enzyme in human retinoblastoma cell lineage Y79. Y79 cells were grown in 25 cm2 bottles in RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum, 1% L-glutamine, 100 U / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin at 37º. C in a 5% CO2 atmosphere. Cells were maintained in suspension with the maximum concentration of 2x106 cells / ml. The cells were processed for protein extraction for further western blotting and also for we found an intense labeling by immunofluorescence for CB1, CB2 and TRPA1 receptors, located in the peri-cytoplasmic region of Y79 cells. However, we could not detect FAAH enzyme. To confirm these results, western blotting was performed, resulting in confirmation of the presence of all the above components. The characterization of cannabinoid system components in this lineage of retinoblastoma cells allows further studies on the
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/9760
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