Implantação e otimização do ensaio cometa no Laboratório Multiusuário de Apoio à Pesquisa em Nefrologia e Ciências Médicas-LAMAP

Abstract

Introdução: O ensaio cometa é uma técnica sensível, de baixo custo e alta reprodutibilidade que tem por finalidade detectar dano ao DNA. A técnica demonstra potencial para melhor entendimento das associações entre exposição a medicamentos, envelhecimento, doenças crônicas e dano ao DNA, por isso mostra-se ser uma aquisição vantajosa para o LAMAP que possui histórico de pesquisa de tais associações. Objetivo: Implementar e otimizar o ensaio do cometa utilizando sangue total periférico humano no LAMAP. Materiais e métodos: A implementação foi baseada no protocolo do curso Ensaio cometa (Fiocruz), sendo utilizados, amostra controle positivo, amostras de sangue periférico de indivíduos saudáveis e amostras de sangue periférico de pacientes portadores de Diabetes Mellitus tipo 2 atendidos no ambulatório de oftalmologia do HUAP/UFF. Após três etapas de adequação do protocolo, amostras de sangue periférico frescas e congeladas foram comparadas. Os pacientes com diabetes foram analisados em três tempos: T0: Jejum, T1: 30 minutos após a alimentação de uma dieta prova e T2: 90 minutos após a segunda coleta. Resultados: A técnica foi implementada com sucesso resultando na elaboração de um procedimento operacional padrão. Foi observada dano maior nas amostras congeladas. Comparando as amostras dos pacientes dos pacientes diabéticos e controles, ambos os grupos apresentaram danos ao DNA. Entretanto, amostras dos pacientes diabéticos demonstraram um aumento de dano, conforme o aumento de tempo após um pico hiperglicêmico. Conclusão: O ensaio do cometa deve ser utilizado com amostras frescas de sangue periférico humano. Ainda, o ensaio do cometa apresenta boa aplicação em amostras de pacientes diabéticos, sugerindo grande potencial para o estudo de doenças crônicas no LAMAP.