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Title: Implantação e otimização do ensaio cometa no Laboratório Multiusuário de Apoio à Pesquisa em Nefrologia e Ciências Médicas-LAMAP
Authors: Oliveira, Any Caroline Alves de
metadata.dc.contributor.advisor: Silva, Andréa Alice da
metadata.dc.contributor.advisorco: Carvalho, Fabiana Rabe
metadata.dc.contributor.members: Xavier, Analúcia Rampazzo
Verícimo, Maurício Afonso
Issue Date: 2018
Publisher: Universidade Federal Fluminense
Abstract: Introdução: O ensaio cometa é uma técnica sensível, de baixo custo e alta reprodutibilidade que tem por finalidade detectar dano ao DNA. A técnica demonstra potencial para melhor entendimento das associações entre exposição a medicamentos, envelhecimento, doenças crônicas e dano ao DNA, por isso mostra-se ser uma aquisição vantajosa para o LAMAP que possui histórico de pesquisa de tais associações. Objetivo: Implementar e otimizar o ensaio do cometa utilizando sangue total periférico humano no LAMAP. Materiais e métodos: A implementação foi baseada no protocolo do curso Ensaio cometa (Fiocruz), sendo utilizados, amostra controle positivo, amostras de sangue periférico de indivíduos saudáveis e amostras de sangue periférico de pacientes portadores de Diabetes Mellitus tipo 2 atendidos no ambulatório de oftalmologia do HUAP/UFF. Após três etapas de adequação do protocolo, amostras de sangue periférico frescas e congeladas foram comparadas. Os pacientes com diabetes foram analisados em três tempos: T0: Jejum, T1: 30 minutos após a alimentação de uma dieta prova e T2: 90 minutos após a segunda coleta. Resultados: A técnica foi implementada com sucesso resultando na elaboração de um procedimento operacional padrão. Foi observada dano maior nas amostras congeladas. Comparando as amostras dos pacientes dos pacientes diabéticos e controles, ambos os grupos apresentaram danos ao DNA. Entretanto, amostras dos pacientes diabéticos demonstraram um aumento de dano, conforme o aumento de tempo após um pico hiperglicêmico. Conclusão: O ensaio do cometa deve ser utilizado com amostras frescas de sangue periférico humano. Ainda, o ensaio do cometa apresenta boa aplicação em amostras de pacientes diabéticos, sugerindo grande potencial para o estudo de doenças crônicas no LAMAP.
metadata.dc.description.abstractother: Introduction: The comet assay is a sensitive technique, low cost and high reproducibility whose purpose is to detect damage to DNA. The technique demonstrates the potential for better understanding of the associations between exposure to drugs, aging, chronic diseases and damage to DNA, therefore shows himself to be an acquisition advantageous for the LAMAP that has search history of such associations. Objective: To implement and optimize the comet assay using human peripheral blood in the LAMAP. Materials and Methods: The implementation was based on the protocol of the test course comet (Fiocruz), being used, positive control sample, samples from peripheral blood of healthy individuals and samples of peripheral blood of patients with type 2 Diabetes Mellitus treated in the outpatient clinic of Ophthalmology of HUAP/UFF. After three stages of suitability of the protocol, samples of fresh and frozen peripheral blood were compared. Patients with diabetes were analyzed in three times: T0: Fasting, T1: 30 minutes after eating a diet trial and T2: 90 minutes after the second collection. Results: The technique was successfully implemented resulting in the elaboration of a standard operating procedure. Major damage was observed in the samples frozen. Comparing the samples of patients of diabetic patients and controls, both groups showed DNA damage. However, samples of diabetic patients demonstrated an increase in damage, according to the increase of time after a hyperglycemic peak. Conclusion: The comet assay should be used with fresh samples of human peripheral blood. Still, the test of comet presents good application in samples of diabetic patients,a high potential for the study of chronic diseases in the LAMAP.
URI: https://app.uff.br/riuff/handle/1/9797
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