IMPLANTAÇÃO E OTIMIZAÇÃO DO ENSAIO COMETA NO LABORATÓRIO MULTIUSUÁRIO DE APOIO À PESQUISA EM NEFROLOGIA E CIÊNCIAS MÉDICAS-LAMAP
Dano ao DNA
Eletroforese
Diabetes
Ensaio cometa
Implantação da técnica do ensaio cometa
Teste piloto pacientes diabéticos
Otimização da técnica
Comet assay
Damage DNA
Electrophoresis
Diabetes
Oliveira, Any Caroline Alves de | Posted on:
2018
Abstract
Introdução: O ensaio cometa é uma técnica sensível, de baixo custo e alta reprodutibilidade que tem por finalidade detectar dano ao DNA. A técnica demonstra potencial para melhor entendimento das associações entre exposição a medicamentos, envelhecimento, doenças crônicas e dano ao DNA, por isso mostra-se ser uma aquisição vantajosa para o LAMAP que possui histórico de pesquisa de tais associações. Objetivo: Implementar e otimizar o ensaio do cometa utilizando sangue total periférico humano no LAMAP. Materiais e métodos: A implementação foi baseada no protocolo do curso Ensaio cometa (Fiocruz), sendo utilizados, amostra controle positivo, amostras de sangue periférico de indivíduos saudáveis e amostras de sangue periférico de pacientes portadores de Diabetes Mellitus tipo 2 atendidos no ambulatório de oftalmologia do HUAP/UFF. Após três etapas de adequação do protocolo, amostras de sangue periférico frescas e congeladas foram comparadas. Os pacientes com diabetes foram analisados em três tempos: T0: Jejum, T1: 30 minutos após a alimentação de uma dieta prova e T2: 90 minutos após a segunda coleta. Resultados: A técnica foi implementada com sucesso resultando na elaboração de um procedimento operacional padrão. Foi observada dano maior nas amostras congeladas. Comparando as amostras dos pacientes dos pacientes diabéticos e controles, ambos os grupos apresentaram danos ao DNA. Entretanto, amostras dos pacientes diabéticos demonstraram um aumento de dano, conforme o aumento de tempo após um pico hiperglicêmico. Conclusão: O ensaio do cometa deve ser utilizado com amostras frescas de sangue periférico humano. Ainda, o ensaio do cometa apresenta boa aplicação em amostras de pacientes diabéticos, sugerindo grande potencial para o estudo de doenças crônicas no LAMAP.
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Document type
Trabalho de conclusão de cursoSubject(s)
Ensaio cometaDano ao DNA
Eletroforese
Diabetes
Ensaio cometa
Implantação da técnica do ensaio cometa
Teste piloto pacientes diabéticos
Otimização da técnica
Comet assay
Damage DNA
Electrophoresis
Diabetes
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